Показати скорочений опис матеріалу
Cytogenetic research of mesenchymal stem cells from rat umbilical cord in cultivated in vitro
Цитогенетичне дослідження мезенхімальних стовбурових клітин із пуповини щурів, культивованих in vitro
| dc.creator | Загричук, О. М. | |
| dc.creator | Палій, І. Р. | |
| dc.creator | Довгалюк, А. І. | |
| dc.creator | Крамар, С. Б. | |
| dc.creator | Лавренчук, Г. Й. | |
| dc.date | 2022-06-08 | |
| dc.date.accessioned | 2026-07-07T10:20:30Z | |
| dc.date.available | 2026-07-07T10:20:30Z | |
| dc.identifier | https://ojs.tdmu.edu.ua/index.php/bmbr/article/view/12970 | |
| dc.identifier | 10.11603/bmbr.2706-6290.2022.1.12970 | |
| dc.identifier.uri | https://repository.tdmu.edu.ua//handle/123456789/30542 | |
| dc.description | Summary. The results of preclinical researches and clinical trials indicate the high efficiency of the use of stem cells to restore pathologically affected body structures. To obtain high-quality cellular material for regenerative medicine, the important condition is to maintain the cytogenetic stability of stem cell culture in vitro. The aim of the study – cytogenetic analysis of the culture of umbilical cord cells of rat embryos at different passages of cultivation and assessment of the karyotype stability of cultivated stem cells. Materials and Methods. To obtain mesenchymal stem cells (MSCs), the umbilical cords of WISTAR Rattus norvegicus Berkenhout rats were used. The analysis was performed during 8 passages. Metaphase plates were obtained by a modified standard karyotyping technique. After three hours of incubation in 10-7 M colchicine solution, trypsinization of the material was performed. Next, the enzyme was neutralized with conditioned medium and warm hypotonic KCl solution (0.075 M) was added to the cells. The material was fixed with acetic methanol (1:3) on melting ice. The fixing solution was replaced three times, then the cell suspension was dripped onto cold wet slides. The samples were stained with Romanowski-Gimza solution. Cytogenetic analysis of MSC was performed on 30 metaphase plates at each passage. Quantitative abnormalities of the chromosome set (aneuploidy (AP), polyploidy (PP)) were detected in the obtained samples and the number of cells with micronuclei (MN) and mitotic index (MI) were counted. The frequency of AP, PP and MN was calculated per 500 cells (in %). Results. In the study of MSC of the rat umbilical cord in the first passages single disorders in the chromosomal set, such as AP and PP were revealed. The number of cells with cytogenetic abnormalities gradually increased with increasing duration of cultivation, but the percentage of cells with normal karyotype did not decrease until the eighth passage by more than 10 %. The percentage of AP in the first two passages was increasing from 1.5 % to 1.9 %. With further cultivation to 6 passages, the level of AP increased almost 3 times. Over the next two passages, the number of APs has hardly changed. In the first two passages, the percentage of PP was minimal – 1.1–1.3 %. Till the sixth passage, there was an increase in the number of such cells by 2.8 %. When cultivated to the eighth passage, the doubling of the number of chromosomes increased 1.1 times. At the first passage in the culture of MSC a very small percentage of MN (≈0.2 %) was registrated. As the passages continued, the MN number increased by 2.9 %. The MSC's mitotic index was rising from 3.9 to 4.8 % from the first to the fifth passage. With each subsequent passage, the mitotic potential of the cells decreased and by the end of the analyzed cultivation period it was 3.1 %. Conclusions. Karyotyping the rat umbilical cord cells under the selected cultivation conditions showed a slight increase in the percentage of AP and PP. A low percentage of micronuclear cells was also observed. Therefore, in early passages this cell line can be safely used for therapeutic purposes for the treatment of simulated pathologies in rats. | en-US |
| dc.description | Резюме. Результати преклінічних наукових досліджень та клінічних випробувань свідчать про високу ефективність використання стовбурових клітин для відновлення уражених патологією структур організму. Важливою умовою отримання високоякісного клітинного матеріалу для регенеративної медицини є підтримання цитогенетичної стабільності культури стовбурових клітин in vitro. Мета дослідження – цитогенетично проаналізувати культуру клітин пуповинних канатиків ембріонів щурів на різних пасажах культивування та оцінити стабільність каріотипу культивованих стовбурових клітин. Матеріали і методи. Для отримання мезенхімальних стовбурових клітин (МСК) використовували пуповинні канатики щурів лінії WISTAR Rattus norvegicus Berkenhout. Аналіз проводили протягом 1–8 пасажів. Метафазні пластинки отримували за модифікованою стандартною методикою каріотипування. Після тригодинного інкубування у 10-7 М розчині колхіцину, здійснювали трипсинізацію матеріалу. Далі фермент нейтралізували кондиційним середовищем і до клітин додавали теплий гіпотонічний розчин KCl (0,075 М). Матеріал фіксували оцтовим метанолом (1:3) на танучому льоді. Фіксатор замінювали тричі, потім суспензію клітин розкапували на холодні вологі предметні скельця. Зразки фарбували розчином Романовського – Гімзи. Цитогенетичний аналіз МСК проводили на 30 метафазних пластинках на кожному пасажі. В отриманих зразках виявляли кількісні порушення хромосомного набору (анеуплоїдію (АП), поліплоїдію (ПП)) та підраховували кількість клітин з мікроядрами (МЯ), мітотичний індекс (МІ). Частоту прояву АП, ПП та МЯ вираховували на 500 клітин (у %). Результати. При дослідженні МСК пуповини щурів вже на перших пасажах виявлено поодинокі порушення в хромосомному наборі, такі, як АП та ПП. Кількість клітин із цитогенетичними аномаліями поступово зростала із збільшенням тривалості культивування, однак відсоток клітин з нормальним каріотипом не зменшився до восьмого пасажу більше ніж на 10 %. Відсоток АП на перших двох пасажах зростав від 1,5 до 1,9 %. При подальшому культивуванні до 6 пасажу рівень АП зріс майже в 3 рази. За два наступних пасажі кількість АП майже не змінилася. На перших двох пасажах відсоток ПП був мінімальний – 1,1–1,3 %. До шостого пасажу відзначали підвищення кількості таких клітин у 2,8 %. При культивуванні до восьмого пасажу подвоєння числа хромосом зросло ще в 1,1 раза. У першому пасажі в культурі МСК був зареєстрований дуже малий відсоток МЯ (≈0,2 %). При продовженні пасажування їхня кількість зросла на 2,9 %. Мітотичний індекс МСК зростав з першого до п’ятого пасажу з 3,9 до 4,8 %. З кожним наступним пасажем мітотичний потенціал клітин знижувався і до завершення аналізованого періоду культивування становив 3,1 %. Висновки. Аналіз каріотипу клітин пуповини щурів за підібраних умов культивування показав незначне зростання відсотка АП та ПП. Також спостерігали низький відсоток клітин з мікроядрами. Отже, на ранніх пасажах дану клітинну лінію можна безпечно використовувати з терапевтичною метою для лікування змодельованих патологій у щурів. | uk-UA |
| dc.format | application/pdf | |
| dc.language | ukr | |
| dc.publisher | Ternopil National Medical University | uk-UA |
| dc.relation | https://ojs.tdmu.edu.ua/index.php/bmbr/article/view/12970/12144 | |
| dc.rights | Авторське право (c) 2022 Вісник медичних і біологічних досліджень | uk-UA |
| dc.rights | https://creativecommons.org/licenses/by/4.0 | uk-UA |
| dc.source | Bulletin of Medical and Biological Research; No. 1 (2022): Bulletin of Medical and Biological Research; 39-44 | en-US |
| dc.source | Вісник медичних і біологічних досліджень; № 1 (2022): Вісник медичних і біологічних досліджень; 39-44 | uk-UA |
| dc.source | 2706-6290 | |
| dc.source | 2706-6282 | |
| dc.source | 10.11603/bmbr.2706-6290.2022.1 | |
| dc.subject | мезенхімальні стовбурові клітини | uk-UA |
| dc.subject | цитогенетичне дослідження | uk-UA |
| dc.subject | анеуплоїдія | uk-UA |
| dc.subject | поліплоїдія | uk-UA |
| dc.subject | mesenchymal stem cells | en-US |
| dc.subject | cytogenetic study | en-US |
| dc.subject | aneuploidy | en-US |
| dc.subject | polyploidy | en-US |
| dc.title | Cytogenetic research of mesenchymal stem cells from rat umbilical cord in cultivated in vitro | en-US |
| dc.title | Цитогенетичне дослідження мезенхімальних стовбурових клітин із пуповини щурів, культивованих in vitro | uk-UA |
| dc.type | info:eu-repo/semantics/article | |
| dc.type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion |
Долучені файли
| Файл | Розмір | Формат | Переглянути |
|---|---|---|---|
|
Даний матеріал не має долучених файлів. |
|||