Розробка та валідація методик аналізу мельдонію і метопрололу в лікарських засобах та плазмі крові

Abstract

У дисертаційній роботі наведено експериментальне дослідження розробки аналітичних та біоаналітичних методик визначення метопрололу та мельдонію в субстанції, лікарських засобах та плазмі крові. Продемонстровано узагальнені підходи до розробки оригінальних експресних аналітичних та біоаналітичних методик визначення АФІ та готових ЛФ метопрололу та мельдонію, а також їх комбінації. Розроблено та валідовано оригінальні спектрофотометричні методики кількісного визначення метопрололу тартрату в субстанції та ЛЗ за реакцією з БКЗ, БФС, БТС, експериментально обґрунтувано оптимальні умови проведення кількісного визначення. Вперше запропоновано методологію вибору реагенту для розробки спектрофотометричних методик визначення мельдонію в субстанції та ЛЗ. Розроблено та валідовано оригінальну спектрофотометричну методику кількісного визначення мельдонію в субстанції та ЛЗ за реакцією з алізарином, встановлено оптимальні умови проведення кількісного визначення. Запропоновано хроматографічні умови і розроблено експресні та екологічно безпечні ВЕРХ-методики кількісного визначення мельдонію в субстанції та ЛЗ з використанням хроматографічної колонки Agilent Zorbax C-18 SB (4.6 мм i.d. X 150 мм, 3.5 мкм). В результаті проведених досліджень, отримано 8 ВЕРХ варіацій. Валідація аналітичних методик показала їх придатність для цілей фармацевтичного аналізу. Продемонстровано методологію розробки ВЕРХ-методики одночасного визначення двох аналітів із різницею в полярностях (мельдоній та метопролол) та запропоновано хроматографічні умови для розробки ВЕРХ-методики одночасного визначення метопрололу та мельдонію в ЛЗ. Розроблено та валідовано оригінальні ВЕРХ-методики одночасного визначення метопрололу та мельдонію в бінарній суміші і ЛЗ з використанням хроматографічних колонок (LiChrospher 100 CN двох розмірів (4 мм × 250 мм, 5 мкм), (4 мм × 125 мм, 5 мкм), Waters Spherisorb CNRP (4.6 мм × 250 мм, 5 мкм), ZORBAX StableBond CN (4.6 мм × 250 мм, 5 мкм)), які сформульовано в 12 варіацій. Рекомендовано 9 (рухома фаза – ACN – 0.15 % NH4H2PO4 (60:40), хроматографічна колонка – Zorbax CN SB) та 10 (рухома фаза – ACN – 0.15 % NH4H2PO4 (50:50), хроматографічна колонка – Zorbax CN SB) варіації як оптимальні, оскільки стостерігалися низькі значення МВ та МКВ, експресність (час хроматографування – 3.5 хв), бал за методом AGREE – 0.77. Запропоновано хроматографічні умови для розробки біоаналітичної методики визначення метопрололу та мельдонію в плазмі крові та розроблено оригінальну ВЕРХ-МС/МС методику кількісного визначення метопрололу та мельдонію в плазмі крові, що може бути застосована лабораторіями з вивчення фармакокінетики та біоеквівалентності ЛЗ, які містять метопролол та мельдоній. На підставі запропонованих принципів та підходів розроблено оригінальну ВЕРХ-МС/МС методику визначення метопрололу та мельдонію в плазмі крові (патент України на корисну модель № 143684 від 10.08.2020).